تابع خطوات استخلاص الـ DNA *من الدم*

جـ / DNA precipitation الأيزوبروبانول ضعف كمية العينة :
1- نضع الرائق "suernatant " في أنبوب نظيف يحتوي على 10 مل من الأيزوبروبانول في أنبوب 50 مل
2- نرجها بشكل خفيف بواسطة اليد قرابة الـ50 مرة إلى أن تظهر خيوط الـ DNA
3- نعمل لها طرد مركزي "centrifuge " ثلاثة الاف دورة لمدة 3 دقائق .
4-يترسب الـ DNA , نتخلص من الرائق بحذر شديد ونحافظ على الـ DNA
5- نضفي الـ DNA ونتركه يجف بقلب الأنبوبة على مناديل ورق .
6- نضيف 5 مل من كحول الإيثانول 70 % ونحرك الانبوبة باليد إلى أن نغسل الـ DNA
7- نعمل لها طرد مركزي ثلاث ألاف دورة لمدة 1 دقيقة ( لترسيب الـ DNA)
8- نتخلص من الرائق ونحافظ على الـ DNA ونقلب الأنبوبة على مناديل ورق حتى تجف لمدة 20 دقيقة

د/ DNA hydration :(بعد التحضير)

1- نضيف DNA hydraition solution من 150 إلى 300 مايكرولتر , على حسب حجم العينة .

2- بعد الإنتهاء من الخطوة السابقة , إما أن :

أ/ نضعها في حمام مائي درجته 65 لمدة ساعة .

ب/ نضعها لمدة يوم كامل في درجة حرارة الغرفة

3- الان أصبحت عينة الـ DNA جاهزة لقياس التركيز بوحدة النانو جرام .

4- نعمل working DNA ونعوض بالقانون (C1 ×V1 =C2 ×V1 )

5 - نكتب جميع البيانات على الأنبوبة , ثم نضعه غي الفريزر 20 درجة /م .

هـ / عملية قياس التركيز بجهاز الإمتصاص الطيفي spectrophotometer :

1- البلانك (blank ) :

نضع 100 مايكروليتر من Deionized water أو DNA hydration solution

ويجب أن تكون القيمة صفر ليقرأ تركيز باقي العينات بالشكل الصحيح .

2- العينة (sample) :

نأخذ 2 مايكروليتر من العينة DNA + 98 مايكرو ليتر Deionized water أو DNA hydration solution

وظيفة المحاليل خلال عملية الاستخلاص :

1- RBC lysiss ---> تكسير كريات الدم الحمراء .

2- cell lusiss solution ---> وظيفة تذويب محتويات الخلية ماعدا DNA .

3- protein precipitation solution ---> وظيفة التخلص من البروتين .